RESUMO
Os estudos ambientais especificam de ferramentas novas analíticas que permitem se estabelecer e diagnosticar as possíveis conseqüências nos seres vivos, os sistemas de produção, agrícola e pescando recursos, e em definitivo a influência deles no homem e os ambientes urbanos. O estudo da presença dos poluente deveria ir junto para suas respostas biológicas. Estes estudos são especialmente importantes quando eles forem disruptores endócrino (‘organometálicos’ combinação, detergentes, PAHs, PCBs) considerado pela ação crítica deles nos sistemas aquáticos como conseqüência de não ter purificador eficiente para estes poluente. A colocação sobre para metodologias apropriadas e eficientes analíticas para estes poluente deveria ir junto para o ómicas de tecnologias de desenvolvimento que pode fazer um papel essencial para um conhecimento maior das respostas biológicas. Esta proposta é centrada em pântanos e ecossistemas aquáticos da região fronteiriça de Espanha e Portugal. É em particular considerado a Baía de Cádiz, o Riacho de Huelva, o Lugar Natural Marimas de Odiel (Huelva), nesses que numerosos pássaros migratórios e uma população rica habitam de covarde, o Marisma Domingo Rubio, os Pântanos de Ilha a Cristina, o Rio Guadiamar (em Espanha Portugal oposta) e o Riacho Formosa (Portugal). Como bioindicadores que Scrobicularia chamam, galinha de Chamalaea e diversicolor de Nerea eram usados, embora o estudo não exclui o estudo de algum ictícola de espécies ou marisqueras de comecial de interesse ou alimentar.
Serão usadas metodologias analíticas de última geração como as ligações HPLC-MS, HPLC-ICP-MS, proteómicos de procedimentos baseado em 2-DE com MALDI-TOF-MS e metalómicas técnico com cromatografía multidimensional, ICP-MS e espectrometría de massas em tandem.
PROPÓSITO DO PROJETO
Antecedentes
O Sudoeste da península ibérica, especialmente na área de borda entre a Espanha e Portugal ambientes diversos aquáticos, estuários e pântanos existem de quem situação ambiental depende criticamente das contribuições de substâncias poluentes como conseqüência da atividade agrícola e industrial, como também da influência desses vertida urbano e acuicolas. Um grande número dos poluente famosos é tratado e eliminou das águas residuais por meio de uma rede normalizada de purificar, mas em recentes datas foi descoberta a presença de poluente novos (poluente emergentes) de quem natureza química limita a ação dos sistemas de purificação. Entre eles eles são o disruptores endócrino (DE) cujo fugas de ação toxicológicas, também, para o processo normal de avaliação do risco ambiental. Uma característica importante de EDs é que estas substâncias podem exercitar sua ação até mesmo em imensamente baixas concentrações. Alguns deste disruptores do sistema endócrino são de origem natural enquanto outro muitos são antropogénicos e eles podem afetar a todo o tipo de organismos vivos.
Estude área
O estudo será centrado em ecossistemas diversos do sistema litoral do Sudoeste de Espanha-Portugal (região Algarve-Huelva) onde vários pântanos de grande importância ecológica ficam situados: Formosa (Portugal), riso de Rio Guadiana (Espanha-Portugal), Pântanos de Ilha a Cristina (Huelva), Lugar Pântanos Naturais de Odiel (Huelva) nesses que numerosos pássaros migratórios e uma população rica habitam de covarde (Scrobicularia chamam, diversicolor de Nereis, galinha de Chamelaea).
Propósito
É buscado desenvolver procedimentos analíticos para o estudo, a caracterização e diagnose da presença de fármacos genérico de caráter em amostras de pântanos com importância ecológica da fronteira sul de Espanha-Portugal, na área Algarve-Huelva.
OBJETIVOS DO PROJETO
Objetivo Geral
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Desenvolver procedimentos analíticos para o estudo, a caracterização e diagnose da presença de fármacos genérico de caráter em amostras de pântanos com importância ecológica da fronteira sul de Espanha-Portugal, na área Algarve-Huelva.
Objetivo Específico
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Pôr para apontar metodologias analíticas para a análise de disruptores endócrino nos ecossistemas em estudo.
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Aplicar metodologias analíticas em ecossistemas do Sudoeste de Espanha-Portugal (região Algarve-Huelva).
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Estudar biomarcadores molecular fundado na caracterização de antioxidativas de enzimas, biotransformadoras de enzimas, danifica oxidativos em biomoléculas e níveis de 'metalotioneinas' e 'acetilcolinoesterasa'.
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Estudar os efeitos causados por fármacos em bioindicadores diverso da área de estudo: (EU) S. página (hepatopancreas e brânquias) e diversicolo de Nereis.
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Integrar os resultados e análise de dados.
METODOLOGIA E PLANO DE TRABALHO
Ele seria levado fora uma amostragem de lodo e organismos em estações selecionadas em cada um das áreas de estudo em ordem para:
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Analisar os níveis de Ibuprofeno combinação, Diclofenac e Carbamezapine em estações diversas.
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Levar a cabo testes no efeito dos farmacêuticos em peixe, moluscos e copépodos, analisando respostas para nivelar de oxidativo de estrés, proteómico e genómico.
A. Definindo sobre como metodologia para análise de disruptores endócrino.
Poluente metálicos e espécies de substância química
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Análise de metais totais
A determinação de metais será feita nas amostras de chãos / lamas e biota (Scrobicularia chamam e galinha de Chamelaea e diversicolor de Nereis). O liofilizadas de amostras do bioindicadores sofrerão ataque para microondas e análise com ICP-MS, com a cela de colisão quando é necessário.
- Especiación de mercúrio
As amostras que usam um procedimento que o grupo de UHU desenvolveu serão analisadas. Esta metodologia está baseado no uso de HPLC juntado o ICP-MS por meio de um dispositivo para a geração de vapor frio (HPLC-C.V.-ICP-MS), levando a cabo a extração prestou atenção com banheiro de ultrasonidos para o tecido prova e separando a água intersticial do lodo prova para sua análise.
- Selênio Especiación
Será usado um procedimento estado pelo grupo de UHU, baseado na ligação HPLC-PC-MS, extraindo as espécies com ultrasonidos.
- Lata Especiación
Será usado procedimentos desenvolvidos em UHU para análise de amostras ambientais (lodos e biota), previamente usou em dois projetos europeus (HIC-TBT e OT-CAIXA FORTE; http://www.ivm.falw.vu.nl/Research_projects/index.cfm).
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Arsênico Especiación
A análise das espécies será feita com HPLC - (UV) - o HG-ICP-MS [63,64], com uma interface para a geração de hidruros, e um componente opcional com abajur UV, nesta interface, para destruir a parte orgânica da molécula, quando as espécies de arsênico não geram hidruros (e.g. arsenobetaína).
Microcontamientes orgânico
- Plaguicidas e PCBs Para a análise de plaguicidas e PCBs em úteros ambientais, um procedimento convencional será usado baseado no soxhlet de extração e prificación com alumina básica ou Florisil, enquanto sendo determinado os poluente por cromatografía de gases com descobrir de captura de elétrons (GC-ECD) e/ou descobrir de massas mais gerais (GC-MS) de caráter, mas que apresenta uma grande seletividade de seu modo o MS / MS.
- Hidrocarboneto serão analisados policíclicos aromático (PAHs) 16 PAHs prioritário considerado por EPA, IARC e o Programa Nacional de Toxicologia. A análise de tecidos e lodos será feita procedimentos seguintes usados pelo grupo de EUA e outros autores com variantes leves.
- Sulfonatos de alquil-benzeno lineares (LAS) Nesta fase inicial do estudo a presença destes poluente será analisada em chãos / lodos que usam uma variante do procedimento desenvolvidos pelo grupo de EUA para lodos de purificar.
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Poluente Emergentes Serão desenvolvidos procedimentos rápidos para a extração de microcontaminantes orgânico, plaguicidas, PCBs, PAHs e ESSES em chãos / lodos e biota. Sistemas de extração PLE, MAE, PARA CIMA e MDSE será estudado. Em PLE será considerado de um modo especial a purificação simultânea na cela de extração. Para clorados de plaguicidas e PCBs um procedimento será aperfeiçoado desenvolvido pelo grupo de UHU para poluente clorados volátil em amostras de comidas que usa a ligação o SPME-GC-ECD-ICP-MS. Para estudar plaguicidas de baixos procedimentos de volatilidade, eles serão desenvolvidos baseado no cromatografía líquido juntado a descobrir de massas híbridas (QqQ e QqTOF).
B. Definindo sobre como metodologia para análise de disruptores endócrino.
As metodologias analíticas serão aplicadas desenvolvido na tarefa prévio para amostras de lodos e bioindicadores que serão obtidos em uma campanha de amostragem. O bioindicadores selecionaram em função da experiência adquirida no estuios prévio de CONTAMAR LÍQUIDO e PROTEOBIOMAR, é: Scrobicularia bivalve chamam e galinha de Chamelaea e o poliqueto diversicolor de Nereis.
C. Estude de biomarcadores convencional bioquímico
Em citosólicos de extratos de glândula digestiva de controle animal e problema serão analisados cinco biomarcadores sensível bioquímico a tipos diferentes de poluente:
- Malondialdehido (MDA), subproduto do oxidativo de ataque para lipídios
- Glicose-6-P deshidrogenasa (G6PDH), atividade sensível para metais e prooxidantes combinação
- Carboxilesterasa (CbE), atividade inibida pelo plaguicidas que OPs e CMs descobriram em Doñana
- Carbonização (Prot.C=O) e oxidação de grupos - SH (Prot.S-S) de proteínas, modificações de oxidativos de indenizações.
Serão avaliados os níveis deste biomarcadores molecular no bioindicadores e serão selecionados áreas. Isto permitirá estabelecer possíveis correlações entre a presença de disruptores endócrino e os efeitos deles/delas nos organismos vivos da área.
Proteómicos de estudos e metalómicos
- Metalómico de análise em primeira dimensão (SEC) serão estudados o citosólica de fração do hepatopancreas do bioindicadores (20-30 indivíduos) nos pontos de amostragem diversos. A análise será levada usar o cromatografía de exclusão de tamanho (SEC) juntado em série a um UV detector e outro atômico (ICPMS) (1697).
- Metalómico de análise em segunda dimensão [(RP, RP-IP, SAXOFONE, SCX) HPLC]. O objetivo desta segunda dimensão é purificar as frações de primeiras horas e separar diferente escolhe cromatográficos que facilita a identificação do metalobiomoléculas por MS.
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Identificação para espectrometría de massas de metalobiomoléculas diferencialmente expresso. O metalobiomoléculas presente nos picos mais interessantes, separe por meio de ambos o cromatográficas de dimensões, eles também serão identificados por espectrometría de massas em tandem.
D. Coordenação e integração final de resultados
Os grupos do consórcio entrarão em contato permanente, graças aos recursos atuais telemáticos, para a coordenação dos trabalhos deles/delas. Eles também serão organizados lojas cada 6 meses de um modo alternativo em Huelva e Farol para troca de experiências e informação, harmonização de resultados e transferência de conhecimento metodológico.
TIME PARTICIPANTES E REGISTRO DO GRUPO DE INVESTIGAÇÃO
Times participantes
- JOSE LUIS GÓMEZ ARIZA. Email:
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- MARIA JOAO BEBIANO. Email:
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- JULIAN BLASCO. Email:
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- TAMARA GARCÍA BARRERA. Email:
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- RUT FERNANDEZ TORRES. Email:
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- MACARENA GONZÁLEZ FERNÁNDEZ. Email:
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- FERNANDO MORENO ROLDÁN. Email: fernando.moreno@ dqcm.uhu.es
- JOSE MANUEL MANSO SAYAGO. Email: jose.manso@ dqcm.uhu.es
- ROCÍO JARA BIEDMA. Email:
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- MANUEL CONTRERAS ACUÑA. Email:
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- AMANDA GAGO TINOCO. Email:
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Registro do grupo de investigação
O grupo de investigação "Análise Ambiental e Bioanálisis" que pertencem para a Universidade de Huelva (FQM141) e os grupos de investigação do M de Professores. Bebiano (universidade de Algave - farol, Portugal) e J. Blasco (Instituto de Ciências Marinhas - Cádiz) que participam projetam agora, desenvolveu uma muito intensa e frutífera colaboração em projetos e estudos prévios e ele/ela tornou possível o presente pedido em casamento no que são chegadas metodologias realmente inovadoras no campo da Química Analítica e do ómicas, procurando uma integração que permite avaliar a resposta biológica aos efeitos dos poluente nos sistemas ambientais.
O grupo FQM141 do Plano andaluz de objetos pegados de Investigação (PAI) mais que 25 anos que desenvolvem procedimentos de análise novos, especialmente no campo do especiación metálico e metodologias relacionado com o ambiente e a contaminação. A experiência do grupo neste campo o/a levou participar de projetos diversos como 1FD97-0610, REN2002-04366 e CTM2006-08960, CONTAMAR LÍQUIDO e PROTEOBIOMAR que constituem justificações de antecedente do presente proposto.
O grupo FQM-141 é pioneiro na Espanha no campo do especiación químico, o metalómica e os estudos ambientais relacionaram com diferencial e poluente emergentes, depois de ter participado de 11 projetos nacionais e 6 europeus que geraram uns 180 publicações nos últimos 15 anos. O grupo também foi consultado como perito em tópicos ambientais para organismos diversos e entidades de público por meio de acordos ou contratos de investigação.
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